Kaip veikia bakterijų endotoksinų tyrimas?

Bakterijų endotoksinų tyrimas paprastai apima reagentų naudojimą, kurie, sumaišyti tirpale su galimu teršalu, sukelia reakciją, o tai reiškia, kad yra endotoksino. Chromogeninis tyrimas, gelio krešulio testas ir turbidimetrinis tyrimas yra metodai, kuriuos mokslininkai dažniausiai naudoja bakterijų endotoksinų tyrimams. Technikai naudoja šiuos vertinimo metodus įvairioms medžiagoms ir objektams, tikrindami, ar nėra užterštumo endotoksinais. Vanduo, vaistams gaminti naudojamos žaliavos, įranga ir pakuotė turi atitikti endotoksinų standartus.

Bakterijos, grybai ir virusai turi apsaugines išorines membranas, sudarytas iš lipopolisacharidų, dar vadinamų LPS. Šių grandinių lipidinėje dalyje yra endotoksinų. Šios medžiagos paprastai lieka membranoje, bet išsiskiria ląstelių dalijimosi ir ląstelių naikinimo ar lizės metu. Žmonėms šios medžiagos sukelia karščiavimą, nenormalų krešėjimą, septinį šoką ir kitus simptomus, nors, skirtingai nei ląstelėje esantys egzotoksinai, endotoksinai nevirsta toksoidu. Paprastai mikrobiologai tikrina, ar nėra endotoksinų, susijusių su įvairiomis gramneigiamomis bakterijomis, įskaitant E. coli.

Gelio krešulio testas arba Limulus ameboecyte lysate (LAL) tyrimas apima membraną ardančios cheminės medžiagos, gautos iš pasagos krabo, dar vadinamo Limulus polyphemus, amebocitų naudojimą. Technikai pastebi teigiamą endotoksinų požymį, jei, kai lizatas yra veikiamas atitinkamu objektu ar medžiaga, susidaro krešėjimas arba želė. Mikrobiologai paprastai naudoja šį bakterijų endotoksinų tyrimo metodą kartu su chromogeniniu ir turbidimetriniu tyrimu, kad gautų galutinių rezultatų.

Atliekant chromogeninių bakterijų endotoksinų tyrimą, naudojamas specialiai apdorotas LAL. Kai šis lizatas susiliečia su endotoksinu, reakcija įgauna specifinę spalvą. Galutinis bandymo procesas apima tirpalo drumstumo arba drumstumo matavimą. Technikai gelio krešulio testo metu susidariusį tirpalą veikia spektrofotometru, kuris skleidžia šviesos spindulį. Išmatuodami šviesos intensyvumo praradimą pluošte, kai jis praeina per tirpalą, mikrobiologai gali nustatyti, ar yra endotoksino, ar ne.

Laboratorijos darbuotojai paprastai atlieka šiuos tris bakterijų endotoksinų tyrimus du ar tris kartus, kad užtikrintų tikslius rezultatus. Gelio testas nenaudojamas tik, nes jo žemiausia aptikimo riba yra 0.03 Ehrlich vienetų mililitre (EU/ml). Chromogeninis ir turbidimetrinis tyrimas nustato endotoksinus 0.005 EU/ml diapazone. Saugos parametrai labai skiriasi priklausomai nuo bandomos medžiagos. Injekciniam ar drėkinimui naudojamame steriliame vandenyje gali būti ne daugiau kaip 0.25 EU/ml, o steriliame inhaliaciniame vandenyje – iki 0.5 EU/ml.