Priešingai nei būtų galima pagalvoti iš pradžių, biotino antikūnas nėra medžiaga, kuri yra sukelta prieš biotiną. Atvirkščiai, biotino antikūnas yra antikūnas, kuris buvo konjuguotas su biotinu. Biotinas stipriai jungiasi su ligandu – avidinu – kuris savo ruožtu gali būti konjuguotas su šviesoje aptinkamomis molekulėmis, tokiomis kaip fluoroforai. Biotinas ir avidinas sudaro vieną iš stipriausių žinomų biologiškai svarbių kovalentinių ryšių, todėl biotinu ir avidinu konjuguoti ligandų/receptorių vienetai yra ypač naudingi moksliniams tyrimams.
Biotinas yra B grupės vitaminų kompleksas – vitaminas B7. Tai tokia maža molekulė, kad kelios biotino molekulės gali būti konjuguotos su vienu monokloniniu arba polikloniniu antikūnu. Tai, kad biotinas taip pat yra tirpus vandenyje, leidžia naudoti buferines sistemas daugiau nei tuo atveju, jei jis būtų netirpus. Siekiant didesnio specifiškumo, dažnai rekomenduojama monokloninių antikūnų konjugacija su biotinu, o ne polikloninių antikūnų konjugacija. Biotino molekulė gali būti tiesiogiai sujungta su dominančiu antikūnu arba gali būti susieta per molekulinę uodegą, kad būtų suteikta daugiau judėjimo laisvės.
Biotino ligandas avidinas randamas kiaušinių albumine. Jis gali būti pigiai pagamintas ir lengvai izoliuotas. Prie kiekvieno biotino receptoriaus prisijungs kelios avidino molekulės, sustiprindamos vieną antikūnų aptikimo signalą. Kai biotino antikūnas prilimpa prie dominančio antigeno, eksperimentatorius gali paveikti kompleksą su avidinu, konjuguotu su fluoroforais, todėl kompleksą galima aptikti. Naudojant fluorescencinį vaizdą, biotino antikūnas ir su avidinu konjuguotas ligandas gali būti aptikti naudojant šviesos mikroskopiją, o dominančius antigenus galima tirti in situ.
Nors biotino antikūno ir fluorescenciniu būdu pažymėtos avidino molekulės sukūrimas ir naudojimas yra įprastas antigeno aptikimo sprendimas, yra alternatyvų, kuriose vis dar naudojamas biotino / avidino kompleksas. Biotino surišimas su ligandu, pavyzdžiui, neurotoksinu, gali būti naudingas nustatant neuroninių receptorių, paveiktų aptariamo neurotoksino, vietą. Taip pat galima konjuguoti biotiną su nukleotidų seka, tokia kaip pasiuntinio ribonukleino rūgštis (mRNR), kad būtų nustatyta, kur šios nukleotidų sekos paverčiamos baltymais arba aptikti ląstelių mRNR reguliavimą.
Galima nusipirkti biotiniluotų polikloninių arba monokloninių antikūnų, nors biotiniluotų antikūnų gamyba yra daugelio eksperimentuotojų galimybė. Internete galima rasti protokolų, kuriuose siūlomi antikūnų biotinilinimo metodai, nors lengviausiai vykdomi protokolai tiesiogiai susieja biotiną su antikūnu, o ne siūlo, kaip įterpti molekulinį tarpiklį. Molekuliniai tarpikliai tarp biotino ir su juo susijusių antikūnų leidžia didesnius tarpus, kad daugiau molekulių būtų surišimo vietose, o šie biotino antikūnai paprastai yra perkami, o ne gaminami.