Fermentinis imunosorbentinis tyrimas (ELISA) yra imunologijos laboratorijoje atliekamas tyrimas, siekiant nustatyti baltymų kiekį biologiniame mėginyje. ELISA aptikimas reiškia paskutinį tyrimo etapą, kurio metu į plastikinę plokštelę, kurioje yra surištas fermentu pažymėtas antikūnas, pridedamas skaidrus tirpalas arba substratas. Fermentas suskaido substratą ir pasikeičia spalva. Tada galutinio spalvoto tirpalo šviesos absorbcija išmatuojama ELISA plokštelių skaitytuvu arba spektrofotometru.
Yra įvairių tipų ELISA testų, iš kurių du labiausiai paplitę yra netiesioginis ELISA ir fiksavimo, arba sumuštinis, ELISA. Netiesioginis ELISA metodas naudojamas paciento serume aptikti baltymą, žinomą kaip antikūnas. Netiesioginio ELISA tyrimo pavyzdys yra žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV) testas, naudojamas antikūnams prieš ŽIV nustatyti. Sumuštinis ELISA testas aptinka baltymą arba antigeną, užfiksuodamas jį tarp dviejų antikūnų. Hormono žmogaus chorioninis gonadotropinas (hCG), kuris nėštumo metu yra padidėjęs, nustatomas naudojant sumuštinį ELISA testą.
Abu testai turi ELISA aptikimo žingsnį tyrimo pabaigoje. Šis žingsnis apima antikūno, prie kurio prijungta fermento molekulė, pridėjimą. Pridėjus fermentu pažymėto antikūno, pridedamas bespalvis tirpalas, kuriame yra tam fermentui specifinė substrato molekulė. Fermentas suskaido substrato molekulę, o tirpalo spalva keičiasi priklausomai nuo naudojamo derinio. Antikūno arba antigeno kiekis paciento mėginyje nustatomas išmatuojant spalvos pasikeitimo intensyvumą.
Yra keletas fermentų substratų derinių, skirtų naudoti ELISA aptikimo etape. Labiausiai paplitęs fermentas yra krienų peroksidazė (HRP), kuri, be kita ko, gali suskaidyti substrato molekules ortofenilendiamino dihidrochloridą (OPD) ir tetrametilbenzidiną (TMB). Ir OPD, ir TMB skilimas lemia geltoną spalvą, o šių substratų optinis tankis arba šviesos absorbcija matuojamas ELISA plokštelių skaitytuvu. OPD šviesos absorbcija matuojama esant 490 nanometrų (nm) bangos ilgiui, o TMB matuojama esant 450 nm.
Kitas įprastas fermentas, naudojamas ELISA nustatymo etape, yra šarminė fosfatazė. Šis fermentas naudojamas su substratu p-nitrofenilfosfatu (PNPP), taip pat gaunamas geltonas tirpalas. PNPP sugeria šviesą, kurios bangos ilgis yra 405 nm.
Fermentų substratų derinių pasirinkimas paprastai grindžiamas tuo, kokie fermentu pažymėti antikūnai yra parduodami, taip pat kokia įranga bus naudojama šviesos absorbcijai matuoti. Dėl daugybės ELISA aptikimo derinių ELISA testas yra labai universalus. Tai svarbi priemonė ligų tyrimų ir tyrimų laboratorijose.