Kas yra genų biblioteka?

Genų biblioteka yra terminas dezoksiribonukleino rūgšties (DNR) fragmentų rinkiniams, kurie buvo atsitiktinai klonuoti iš organizmų genomų. Jie klonuojami kaip plazmidės, kurios gali daugintis atskirai nuo savo chromosomų ir fagų, kurie yra parazitinis virusas, mintantis bakterijomis. Kai klonuojama kaip plazmidės, rinkinį sudaro ląstelės-šeimininkės ir kiekvienoje iš jų yra DNR fragmentas. Fagų genų bibliotekos sudarytos iš vadinamųjų fagų lizatų, kurie yra sunaikintų ląstelių likučiai su įterptu DNR fragmentu. Kai genų bibliotekose yra visos genetinės informacijos apie organizmą rinkinys, jos laikomos reprezentacine genų biblioteka.

Be to, bibliotekos gali naudoti ląstelių rekombinantinę nukleino rūgštį (RNR) medžiagoms pritvirtinti, o ši ląstelių-šeimininkų kolekcija su rekombinantiniais vektoriais yra žinoma kaip cRNR genų biblioteka. Atliekant genų bibliotekos atranką, nustatomos konkrečios ląstelės, kuriose yra klonavimo vektorių, o genų bibliotekoje ieškomas tam tikras genas, o tada naudojamas vienas iš daugelio jų išskyrimo ir surinkimo metodų. Surinktos ląstelės laikomos klonuotomis. Norint turėti pagrįstą galimybę išskirti ir klonuoti tam tikrą geną, paprastai kaip kiekvienas genas naudojamos tik reprezentacinės genų bibliotekos ir jose surenkamas kiekvienas tam tikro genomo originalus DNR fragmentas. Norint pasiekti 99% tikimybę rasti konkretų žmogaus klonavimo geną, reikia patikrinti daugiau nei 600,000 XNUMX klonuotų ląstelių, kad būtų galima rasti norimą geną iš reprezentacinės genų bibliotekos.

DNR išgaunama iš organizmo, kad būtų sukurta genų biblioteka. Biblioteka sukurta taip, kad sutvarkytų DNR ir tūkstančius skirtingų genų. Biblioteka tampa dešimčių tūkstančių bakterijų kolonijų kolekcija, kiekviena moduliuojama DNR fragmentu iš organizmo, kuriame yra ypatingai dominantis genas. Bibliotekose taip pat yra restrikcijos fermentų ir plazmidės. Restrikcijos fermentai naudojami DNR nukleotidų informacijai nuskaityti ir naudojami DNR supjaustymui į fragmentus, atskiriant nukleotidus vieną nuo kito.

Tie patys restrikcijos fermentai supjausto bakterines plazmides, o fragmentai ir plazmidės sujungiami mėgintuvėlyje, kad susijungtų ir susidaro naujas derinys. Tada šios rekombinantinės plazmidės grąžinamos atgal į bakterijų kultūrą naudojant šilumos šoką arba elektroporaciją. Šie veiksmai atliekami vėl ir vėl, kol iš visų pradinės DNR ekstrakcijos fragmentų tam tikram genomo organizmui suformuojama visa genų biblioteka.