Northern blot hibridizacija yra metodas, naudojamas norint nustatyti pasiuntinio RNR (mRNR) lygius mėginyje ir kiekybiškai įvertinti esančio mRNR kiekį. Nors egzistuoja ir kiti galingesni metodai, Northern blot išlieka standartas dėl savo paprastumo ir naudojimo paprastumo. „Northern blot“ metodas taip pat leidžia tiesiogiai palyginti kelis mėginius viename eksperimente.
Messenger RNR yra nukleino rūgšties rūšis, kuri susidaro ekspresuojant geną. Genas, kuris yra įjungtas ir veikia ląstelėje, yra transkribuojamas į mRNR. Tada mRNR pernešama į ląstelės citoplazmą, kur ji paverčiama baltymu. Todėl ląstelių mRNR mėginio Northern blot analizė gali suteikti naudingos informacijos apie ląstelės gaminamų baltymų masyvą.
Atliekant Northern blot, mRNR išgaunama iš ląstelių ir atliekama denatūruojančio agarozės gelio elektroforeze, kuri leidžia mRNR mėginyje atskirti pagal dydį. Tuo pačiu metu paleidžiami žinomų dydžių mRNR molekulių mėginiai, siekiant užtikrinti kontrolę. Kai elektroforezė baigta, mėginiai perkeliami ir imobilizuojami ant kietos membranos, paprastai pagamintos iš tokios medžiagos kaip nailonas. Po to mėginiai prieš analizę keletą valandų veikiami radioaktyviai pažymėtais zondais. Analizės metu mRNR, kuri hibridizavosi su radioaktyviai pažymėtu zondu, gali būti aiškiai aptikta naudojant rentgeno spindulius.
„Northern blot“ metodas leidžia stebėti genų ekspresijos modelius tarp skirtingų audinių tipų. Galima palyginti iš įvairių audinių ir organų tipų ląstelių išskirtą pasiuntinio RNR, galima ištirti ląstelių atsaką į stresą, infekciją ir daugelį kitų dirgiklių. Žvelgdamas į mRNR ekspresijos skirtumus skirtingomis sąlygomis, mokslininkas gali nustatyti, kokių tipų baltymus ląstelė gamina reaguodama į tam tikrus dirgiklius. Tai gali suteikti užuominų apie nežinomų baltymų funkcijas arba, jei baltymai yra žinomi, informaciją apie ląstelių reakciją į atitinkamus dirgiklius.
Pavyzdžiui, Northern blot gali parodyti, kad nežinomo baltymo ekspresija padidėja reaguojant į specifinio toksino buvimą. Tada galima teoriškai manyti, kad baltymas yra susijęs su toksiškumo mažinimu, galbūt išnešdamas cheminę medžiagą iš ląstelės arba paversdamas ją metabolitu. Jei tiriami žinomi baltymai, baltymų ekspresijos pokyčių dokumentavimas gali suteikti informacijos apie patį atsaką. Pavyzdžiui, jei būtų padidinta žinomo molekulinio transporterio ekspresija, būtų galima patvirtinti, kad ląstelių atsakas į toksiną yra išnešti toksiną iš ląstelės.