Kas yra RNR ekstrahavimas?

Ribonukleino rūgšties (RNR) ekstrahavimas yra laboratorinis procesas, dažniausiai naudojamas molekuliniuose biologiniuose tyrimuose. Išskirdami RNR grandines, mokslininkai gali ištirti įvairių organizmų – nuo ​​bakterijų iki žmonių – genetinius komponentus. Nors dezoksiribonukleorūgštis (DNR) yra labiausiai paplitusi nukleorūgštis, susijusi su genetiniais tyrimais, RNR yra ryšys tarp DNR ir ląstelės baltymų, atsakingų už įvairius struktūrinius vaidmenis. RNR ekstrahavimas leidžia mokslininkams ištirti kelią nuo DNR informacijos iki baltymų gamybos ir ląstelių funkcijos.

Nukleino rūgštys DNR ir RNR pavidalu turi genetinę informaciją, reikalingą ląstelėms funkcionuoti ir daugintis. Ribonukleino rūgštis arba RNR yra ryšys tarp DNR ir ląstelės baltymų. Tam tikri RNR tipai kopijuoja specifines DNR dalis, kad padėtų susidaryti tokiems baltymams. Kelio tarp DNR ir ląstelių baltymų stebėjimas padeda tyrėjams suprasti genų reguliavimą ir baltymų sintezę atskirose ląstelėse. Procesai, palengvinantys RNR išskyrimą ir užtikrinantys mėginio stabilumą, suteikia mokslininkams galimybę sekti kelią tarp DNR ir RNR.

RNR ekstrahavimo metu biologiniai mėginiai redukuojami ir išgryninami tiek, kad RNR išskiriama vėlesniam tyrimui. Molekuliniai komponentai, tokie kaip baltymai, RNR ir DNR, pasiskirsto arba išskiriami skirtingu laiku, kad būtų galima išskirti specifinius RNR tipus. Skirtingiems audiniams ir ląstelių tipams reikalingi skirtingi RNR ekstrahavimo metodai. Nors yra įvairių RNR ekstrahavimo metodų, dažniausiai naudojamas centrifugavimas, siekiant maišyti biologinius mėginius su įvairiais cheminiais junginiais, bendrai žinomais kaip denatūrantais.

Vienas iš dažniausių RNR ekstrahavimo būdų yra ekstrahavimas fenoliu ir chloroformu, taip pat žinomas kaip PC arba PCIA. Taikant šį metodą, audinių mėginiai sumaišomi su lygiomis dalimis fenolio ir chloroformo. Žinomas kaip dvifazis mišinys, tirpalas centrifuguojamas denatūruojančiame tirpale. Susidaro dvi fazės, kurių pirmoji yra vandeninė, o antroji – organinė. Vandeninėje fazėje vyksta RNR ekstrahavimas etanolio nusodinimo pagalba.

Kiti RNR išskyrimo metodai skiriasi, tai priklauso nuo mėginio dydžio, audinio tipo ir nuo to, ar reikalinga visiška ar dalinė RNR. Norint gauti mielių, augalų ar gyvūnų mėginius, reikia pilnos RNR arba visos eukariotinės RNR. Kita vertus, bakterijoms reikia visos prokariotinės RNR. Kiekvienam RNR tipui reikalingas skirtingas mėginio paruošimo, ekstrahavimo ir laikymo būdas.

RNR ekstrahavimo komplikacijos yra dažnos ir paprastai yra susijusios su RNR skilimu po ekstrahavimo. Ribonukleazės fermentai, dažniausiai esantys audinių mėginiuose, greitai skaido RNR. Jei RNR nenaudojama greitai, dėl RNR skilimo mėginys gali tapti nenaudingas. Reaguodama į tai, daugelis RNR ekstrahavimo metodų apima mėginių paruošimo saugojimui etapus prieš ir po ekstrahavimo, siekiant sumažinti arba sulėtinti RNR skilimą.