Biblijos laikais žmonės kalbėjo keturiomis pagrindinėmis kalbomis: lotynų, graikų, aramėjų ir hebrajų. Senasis Biblijos Testamentas iš pradžių buvo parašytas aramėjų ir hebrajų kalbomis, o Naujasis Testamentas buvo parašytas graikų kalbomis. Šis kalbų mišinys atspindi įvairių žmonių, prisidėjusių prie Biblijos kūrimo, kilmę, nes šnekamoji ir rašomosios kalbos skyrėsi priklausomai nuo etninės kilmės, klasės ir išsilavinimo. Trys iš keturių kalbų laikomos mirusiomis kalbomis, o tai reiškia, kad jomis daugiau nekalbama, nors mokslininkai ir toliau jas skaito ir studijuoja. Ketvirtasis, hebrajų, vis dar vartojamas kai kuriose Artimųjų Rytų šalyse ir Toros knygose, žydų Biblijoje.
Aramėjų kalba tikriausiai yra mažiausiai žinoma iš Biblijos laikų kalbų. Šis terminas iš tikrųjų reiškia senovės semitų kalbų, plačiai vartojamų Viduriniuose Rytuose, šeimą. Aramėjų kalba yra glaudžiai susijusi su hebrajų kalba, kuri pasiskolino savo abėcėlės raštą. Biblinė aramėjų kalba nebevartojama, nors šiuolaikinės šeimos kalbos yra naudojamos išsklaidytose pasaulio vietose liturgijai, religinei praktikai ir bendravimui kai kuriuose regionuose. Kalba buvo bendra kalba Palestinoje ir greičiausiai ta kalba, kuria kalbėjo pats Jėzus. VII amžiuje Artimuosiuose Rytuose jį pakeitė arabų kalba.
Biblijos laikais kalbama graikų kalba buvo bendroji graikų kalba, kuri yra susijusi su šiuolaikine graikų kalba, nors ir pakankamai skirtinga, kad šiuolaikinės graikų kalbos žmonės jos nesuprastų. Bendroji graikų kalba buvo pagrindinė tarmė nei rafinuota senovės graikų kalba, kurią vartojo Aristotelis ir Platonas. Nors Biblijos graikų kalba nebėra, kai kurie mokslininkai vis dar skaito Naująjį Testamentą šia kalba. Daug graikiškai kalbančių ir mokslininkų gyveno rytinėse Romos imperijos dalyse ir prisidėjo prie regiono kalbos ir kultūros.
Lotyniškai kalbėjo mokslininkai ir administratoriai. Tai buvo oficiali Romos imperijos kalba, o dokumentai, dekretai ir pranešimai būtų teikiami šia kalba. Mažai tikėtina, kad lotynų kalba buvo plačiai paplitusi tarp paprastų piliečių, nors labiau išsilavinę asmenys galėjo ją vartoti. Lotynų kalba religinei liturgijai buvo priimta tik antrajame amžiuje, kai ji išstūmė graikų kalbą visoje imperijoje. Tai yra romanų kalbų, įskaitant italų, prancūzų, portugalų ir ispanų, tėvas.
Nedaug žmonių Biblijos laikais kalbėjo hebrajų kalba, nes ji didžiąja dalimi buvo pakeista aramėjų kalba, tačiau dauguma žydų skaitė Bibliją hebrajų kalba. XIX a. atgimimas atgaivino biblinę hebrajų kalbą ir išlaikė ją kaip gyvą kalbą, nors ja kalba ribotas skaičius žmonių.
Šios keturios pagrindinės kalbos atstovauja įvairioms kultūroms ir etninėms grupėms, kurios visos yra svarbios Biblijoje. Biblijos tyrinėtojai dažnai studijuoja dvi ar daugiau šių kalbų, siekdami giliau suprasti Bibliją ir jos puslapiuose gyvenančius žmones.