Kas yra zimografija?

Zimografija yra biochemikų atliekama technika, kurios metu dalelės išsklaidomos naudojant elektros krūvį procese, vadinamame elektroforeze. Tiksliau, procese naudojamas substratas, kuriame fermentas polimerizacijos būdu reaguos su polikrilamido geliu, vandens pagrindu pagamintu tirpalu, pagamintu iš toksiškų medžiagų. Šis zimograminis gelis žinomas kaip natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelis (SDS-PAGE).

Biochemikas, atliekantis zimografiją, elektroforezės metodu paruoš zimogramos gelį. Paprastai šis metodas atliekamas kartu su virinimu arba gelio sumažinimu. Tačiau zimografijoje SDS-PAGE gelis išlieka nepakitęs. Po šio etapo junginio SDS dalis pašalinama naudojant medžiagą, žinomą kaip Triton X-100™ – oksidacinį ploviklį iš BASF™ kompanijos. Ši medžiaga ilgą laiką laikoma 98 °F (apie 37 °C) temperatūroje pažangiame inkubatoriuje. Tada biochemikas nudažo likusią medžiagą juodu arba mėlynu junginiu. Tai leidžia tyrėjui nustatyti, kur ir kaip virškinimas vyksta medžiagos fermentais.

Nors SDS-PAGE gelis yra dažniausiai zimografijoje naudojama medžiaga, fermento virškinimo greičiui ir gebėjimui nustatyti galima naudoti kitų tipų medžiagas. Daug kartų tai apima krakmolo plėvelės pridėjimą, kad būtų lengviau vizualiai identifikuoti.

Biochemikai ir biomedicinos inžinieriai paprastai naudoja šį procesą, siekdami sužinoti apie naujas fermentų formas. Apibrėžus fermento virškinimo greitį ir judėjimo modelius, galima nustatyti skirtingas žmogaus ir gyvūninės kilmės baltymų savybes. Tai naudojama tam tikriems genetiniams tyrimams ir analizei, taip pat vaistų ir medicinos reikmėms.

Zimografijos procesas turi būti atliekamas atsargiai. Nors iš esmės tai galima padaryti laikantis minimalių saugos priemonių, bet kuris mokslininkas ar tyrėjas, dirbantis su medžiagomis, turi vengti fizinio kontakto. Tiek Triton X-100™ ploviklis, tiek SDS-PAGE gelis gali būti labai toksiški odai.

Yra keletas fermentų, kurie nereaguoja į šį procesą taip, kaip tikėtasi. Pavyzdžiui, D. melanogaster virškinimo glikozidazės gali išgyventi redukcijos procesus atliekant kitų tipų virškinimo tyrimus. Be to, jis atlaikys kaitinimo procesą iki 122°F (apie 50°C), gerokai viršijant lygį, kurio reikia tradiciniam zimografiniam procesui. Kai fermentas išgyvena procesą visiškai nesuvirškinęs SDS-PAGE gelio, paskutinėse stadijose pastebima padidėjusi juostos skiriamoji geba. Dėl to gali kilti problemų norint gauti teisingus zimografijos proceso rezultatus.